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上海捷易生物科技有限公司(Shanghai Gemple Biotech Co.Ltd)于2010年3月,由國內外知名學府的多名生命科學和臨床醫學從業者始立。公司落戶在張江高科生物醫藥核心園區,專注于新一代技術在遺傳病的臨床檢測以及科研轉化兩大領域的產業化應用。捷易長期致力于遺傳病從分子診斷到疾病建?!糯膊∽芯空宸窠餼齜槳?。 公司簡介 合作伙伴 團隊建設 加入捷易 企業顧問 聯系我們 新聞中心
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Minigene驗證服務



1.Minigene技術簡介


可變剪接是調節基因表達和產生蛋白質多樣性的重要機制,是導致真核生物基因和蛋白質數量較大差異的重要原因,Pre-mRNA剪接是真核生物基因表達的關鍵步驟,其剪接異常直接影響蛋白的結構和功能。隨著新一代測序技術的發展,大量的潛在致病變異被發現,根據文獻報道,大約1/3的致病變異會導致pre-mRNA剪接異常,且大部分致病變異的臨床意義是未知的。


Minigene技術是一種研究基因變異對可變剪接影響的體外功能驗證技術。該技術通過將帶有變異基因的外顯子片段的質粒載體轉染細胞后,利用RT-PCR及Sanger測序檢測異常mRNA產物,進而分析基因變異對pre-mRNA可變剪接的影響(如內含子保留和外顯子切除)。



2.Minigene技術原理






3.Minigene技術應用案例 I


案例1:Minigene技術驗證成人原發性肌張力障礙THAP1基因突變導致剪切異常

Vemula S R, Xiao J, Zhao Y, et al. A raresequence variant in intron 1 of THAP1 is associated with primary dystonia[J].Molecular Genetics & Genomic Medicine, 2014, 2(3):261-272.


THAP1c.71 + 9 C>A變異(內含子上點突變),造成剪切異常,導致2號外顯子不完全剪切,3號外顯子增加,從而影響細胞生長周期。




3.Minigene技術應用案例 II


案例2:Minigene技術驗證瓜氨酸血癥ASS1基因變異導致可變剪接異常

KimaniJ K, Wei T, Chol K,et al. Functional analysis of novel splicing and missense mutations identifiedin the ASS1,gene in classical citrullinemiapatients[J]. ClinicaChimicaActa,2015, 438:323-329


家族1:ASS1c.174+1G變異(內含子上點突變),造成剪切異常,4Exon跳躍,生成截短蛋白; c.422T>G變異(外顯子上點突變),造成兩種剪接異常,7Exon跳躍和7Exon不完全剪切。



3.Minigene技術應用案例 III




家族2:ASS1c.773+1G>A變異,造成兩種剪接異常,即11Exon跳躍和11號內含子保留,c.793C>T變異未引起異常剪接。



項目周期:6-8

客戶提供:攜帶檢測突變DNA樣本,正常DNA樣本

結果交付:

1)構建的載體;

2)實驗報告:包括實驗步驟,引物序列,測序峰圖,結果圖片和分析結果